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口蹄疫病毒O型(FMDV-O)競(jìng)爭(zhēng)ELISA抗體檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
更新時(shí)間:2024-07-19 點(diǎn)擊量:1009

口蹄疫病毒O型(FMDV-O)競(jìng)爭(zhēng)ELISA抗體檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

【產(chǎn)品名稱】

中文名稱口蹄疫病毒O型(FMDV-O)競(jìng)爭(zhēng)ELISAC-ELISA)抗體檢測(cè)試劑盒

英文名稱Competitive ELISA Kit for Detecting Antibody of Foot and Mouth Disease Virus type O

簡(jiǎn)介

口蹄疫(FMD)是由口蹄疫病毒(FMDV)引起的急性、熱性高度接觸性傳染病,主要侵害偶蹄獸,一旦發(fā)病,將會(huì)引起嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。FMDV屬于微核糖核酸病毒科口蹄疫病毒屬,目前已知共有7中血清型,即O型、A型、C型、SAT1、SAT2、SAT3和亞洲1型。

FMDV感染或免疫后,產(chǎn)生抗體的主要中和表位在VP1蛋白,本試劑盒基于VP1蛋白,采用競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(C-ELISA),配備全套診斷試劑和材料,可用于檢測(cè)豬、牛、羊等動(dòng)物血清或血漿中的O型口蹄疫病毒(FMDV-O)抗體,適用于動(dòng)物疫苗免疫抗體的定性檢測(cè)及動(dòng)物群體抗FMDV-O感染風(fēng)險(xiǎn)能力的評(píng)估。試劑盒具有敏感性高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好、操作簡(jiǎn)便快捷的特點(diǎn)。

檢測(cè)原理】

本試劑盒采用競(jìng)爭(zhēng)ELISA法,在酶標(biāo)板上預(yù)先包被FMDV-O VP1重組蛋白作抗原,以針對(duì)VP1蛋白的表位型特異單抗作中和競(jìng)爭(zhēng)抗體(即酶標(biāo)記物)實(shí)驗(yàn)時(shí),加入待檢血清和單抗酶標(biāo)記物,則待檢血清種等FMDV-O特異性抗體與酶標(biāo)記物競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合包被在酶標(biāo)板上的FMDV-O VP1重組蛋白。通過(guò)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分,加入底物顯色。用酶標(biāo)儀450nm波長(zhǎng)測(cè)定反應(yīng)物的OD值,判定實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

試劑盒組分

序號(hào)

組分名稱

數(shù)量

標(biāo)識(shí)

1

FMDV-O 抗原包被板

96T×2

鋁箔袋

2

FMDV-O 酶標(biāo)記物

12 mL

黃色

3

FMDV-O 陽(yáng)性對(duì)照血清

1.5 mL

紅色帽

4

FMDV-O 陰性對(duì)照血清

1.5 mL

綠色帽

5

樣本稀釋液

12 mL

透明

6

10×濃縮洗滌液

50 mL

白色帽

7

顯色劑

12 mL×2

色帽

8

終止液

12 mL

藍(lán)色帽

9

蓋板膜

2

10

說(shuō)明書(shū)

1

樣本要求

盡量使用新鮮采集的血清樣品;不能用于檢測(cè)嚴(yán)重污染或嚴(yán)重溶血的樣品;如果血清樣本渾濁,需離心后取上清進(jìn)行檢測(cè);檢測(cè)樣品可在2~8保存5天,長(zhǎng)時(shí)間保存需要轉(zhuǎn)移至-20或更低溫環(huán)境中。

【實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備】

1試劑盒組分回溫平衡:試劑盒所有組分在使用前取出,置恒溫箱(25±3℃)中至少30 min,恢復(fù)至室溫。

2配制洗滌液將試劑盒提供濃縮洗滌液用去離子水稀釋10(如:10 mL 10×濃縮洗滌液+90 mL去離子水)。

操作方法】

1加樣:按照“微孔板加樣位置示例圖"向抗原包被板樣品孔內(nèi)預(yù)先加入40 µL樣本稀釋液,在對(duì)照孔內(nèi)分別加入50 µL陰性對(duì)照血清(NC)50 µL陽(yáng)性對(duì)照血清(PC)然后在樣品孔中加入10 µL待檢血清,樣品稀釋比例1:5。

微孔板加樣位置示例圖


1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

NC












B

NC












C

PC












D

PC












E

S1












F

S2












G

S3












H

S4












2加酶:每孔加50 μL酶標(biāo)記物,輕輕混勻。樣品稀釋變?yōu)?/span>1:10,即反應(yīng)體系為100 µL/孔。

3溫育輕輕振蕩混勻(勿溢出),蓋上封板膜,37℃孵育30 min。。

4洗板去孔液體,每孔加300 μL洗滌液洗滌3次,最后一次洗滌后將酶標(biāo)板在吸水紙上輕輕拍干,嚴(yán)禁各步驟之間孔板出現(xiàn)干燥情況。

5顯色:每孔加100 μL顯色劑,輕輕混勻,蓋上封板膜,37℃避光孵育10 min。

6終止:每孔加50 μL終止液,振蕩10秒,充分混勻,終止后即讀數(shù)。

7讀數(shù)使用酶標(biāo)儀測(cè)定450 nm波長(zhǎng)處的光密度值OD值)。

【結(jié)果判定】

1.實(shí)驗(yàn)成立條件:性對(duì)照平均OD0.6,陽(yáng)性對(duì)照平均OD0.4

2計(jì)算方法:ODNC均值=(ODNC1ODNC2)/2

3樣品S/N值計(jì)算公式:S/N樣本OD/ ODNC均值

4判定標(biāo)準(zhǔn)S/N0.5,判為陽(yáng)S/N0.5,判為性。

【注意事項(xiàng)】

1儲(chǔ)存條件為2~8℃。試劑盒開(kāi)啟前應(yīng)確認(rèn)其批號(hào)及有效期。

2過(guò)期產(chǎn)品請(qǐng)勿使用,不同批號(hào)的試劑盒組禁止混用。

3試劑盒使用前各組分試劑均須恢復(fù)至室溫(25±3℃),使用后放置2~8℃保存。

4.應(yīng)注意避免向試劑盒中引入污染。移液器吸頭必須一次一換。

5.實(shí)驗(yàn)所用儀器(如:微量移液器、恒濕培養(yǎng)箱、ELISA洗板機(jī)、酶標(biāo)儀)需要在使用前進(jìn)行功能檢查,確保其可用性、準(zhǔn)確性。

6.所有試劑嚴(yán)禁接觸皮膚和粘膜。檢測(cè)結(jié)束后所用耗材需按國(guó)家規(guī)定進(jìn)行無(wú)害化處理。

7.未用的微孔板條可裝入密封袋中2~8保存。

8.試劑盒中各組容器只針對(duì)該組分使用,不可二次利用。

【儲(chǔ)存條件及有效期】

28保存,有效期12個(gè)月。

規(guī)格96T×2/

【生產(chǎn)日期及批號(hào)】

詳見(jiàn)包裝袋和外包裝盒。

 

僅供獸醫(yī)診斷使用

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實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù):


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